Duplicación interna en tándem del gen de la tirosina quinasa 3

Heidys Garrote Santana, Ana María Amor Vigil, Lesbia Fernández Martínez, Carmen Alina Díaz Alonso

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Resumen

Introducción: La reacción en cadena de la polimerasa requiere de varios procedimientos y controles para garantizar la eficacia del estudio. Se debe realizar un control de calidad a la reverso transcripción con el fin de determinar la efectividad del proceso y pasar a la siguiente etapa. Se comprueba con la amplificación de un gen normal, que se interpreta mediante electroforesis. Por dificultades en la importación de reactivos, se propuso sustituir este paso por la identificación del gen de la tirosina quinasa 3, que en la leucemia mieloide aguda puede afectarse por una mutación del tipo duplicación interna en tándem.

Objetivo: Evaluar si el biomarcador duplicación interna en tándem del gen de la tirosina quinasa 3 es útil como control del proceso de reverso transcripción dentro de la técnica de reacción en cadena de la polimerasa para los estudios moleculares.

Métodos: Se analizaron 235 muestras de aspirado medular de pacientes hematológicos, en el laboratorio de biología molecular del Instituto de Hematología e Inmunología entre junio de 2017 y junio de 2019.

Resultados: El 85,53 % presentó solo una banda en la electroforesis capilar, correspondiente al alelo salvaje, y en el resto se observaron la banda normal y la correspondiente al alelo mutado. De esta forma, se comprobó la presencia de ADN complementario en todas las muestras.

Conclusiones: La sustitución del control basado en un gen normal, por el biomarcador duplicación interna en tándem del gen de la tirosina quinasa 3 dentro de la técnica de reacción en cadena de la polimerasa, se realiza como parte del protocolo de laboratorio para el estudio de pacientes con enfermedades oncohematológicas.

Palabras clave

PCR; FLT3; biomarcador.

Referencias

Koutsi A, Vervesou EC. Diagnostic molecular techniques in haematology: recent advances. Ann Transl Med. 2018;6(12):1-9. DOI: https://doi.org/10.21037%2Fatm.2018.05.30

Garrote H, Díaz C. Reacción en cadena de la polimerasa cuantitativa: del “Nobel” a la actualidad. Rev Cub Hematol Inmunol Hemoter. 2019 [acceso 20/02/2020];35(4). Disponible en: http://scielo.sld.cu/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0864-02892019000400009

Döhner H, Estey E, Grimwade D, Amadori S, Appelbaum FR, Büchner T, et al. Diagnosis and management of AML in adults: 2017 ELN recommendations from an international expert panel. Blood. 2017;129(4):424-47. DOI: https://doi.org/10.1182/blood-2016-08-733196

Daver N, Schlenk RF, Russell NH, Levis MJ. Targeting FLT3 mutations in AML: review of current knowledge and evidence. Leukemia. 2019;33(2):299-312. DOI: https://doi.org/10.1038/s41375-018-0357-9

Azad NA, Shah ZA, Pandith AA, Rasool R, Jeelani S. Real-time quantitative PCR: a reliable molecular diagnostic and follow-up tool for ‘minimal residual disease’ assessment in chronic myeloid leukemia. Biosci Rep. 2018;38(5):BSR20180974. DOI: https://doi.org/10.1042/bsr20180974

Hrabovsky S, Folber F, Horacek JM, Stehlikova O, Jelinkova H, Salek C, et al. Comparison of real-time quantitative polymerase chain reaction and eight-color flow cytometry in assessment of minimal residual disease in adult acute lymphoblastic leukemia. Clin Lymphoma Myeloma Leuk. 2018;18(11):743-48. DOI: https://doi.org/10.1016/j.clml.2018.06.030

Hsu CC, Huang CE, Wu YY, Chen YY, Lung J, Leu YW, et al. Quantitative competitive allele-specific TaqMan duplex PCR (qCAST-Duplex PCR) assay: a refined method for highly sensitive and specific detection of JAK2V617F mutant allele burdens. Haematol. 2018;103(10):e450-4. DOI: https://doi.org/10.3324/haematol.2018.187989

Garrote H, Lavaut K, Amor AM, Díaz CA, Fernández L, Ruiz V, et al. Cinco décadas de la biología molecular y la citogenética aplicadas a la hematología cubana. Rev Cub Hematol Inmunol Hemoter. 2017 [acceso 20/02/2020];33(1):1-8. Disponible en: http://scielo.sld.cu/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0864-02892017000100004

van Dongen JJ, Macintyre EA, Gabert JA, Delabesse E, Rossi V, Saglio G, et al. Standardized RT-PCR analysis of fusion gene transcripts from chromosome aberrations in acute leukemia for detection of minimal residual disease. Report of the BIOMED-1 Concerted Action: investigation of minimal residual disease in acute leukemia. Leukemia. 1999;13(12):1901-28. DOI: http://dx.doi.org/10.1038/sj.leu.2401592

Belyaeva OV, Adams MK, Popov KM, Kedishvili NY. Generation of retinaldehyde for retinoic acid biosynthesis. Biomolec. 2020;10(5):1-17. DOI: https://doi.org/10.3390%2Fbiom10010005

Sánchez D, Gargallo P, Romano V, Montero V, Cabrerizo R. Determinación de la mutación FLT3-ITD por dos métodos en pacientes con leucemia mieloide aguda: comparación e implementación de un nuevo método. Rev Hematol. 2018 [acceso 20/02/2020];22(2):134-43. Disponible en: https://revistahematologia.com.ar/index.php/Revista/article/view/17

Nakao M, Iwai T, Kaneko H, Horiike S, Kashima K, Sonoda Y, et al. Internal tandem duplication of the FLT3 gene found in acute myeloid leukemia. Leukemia. 1996;10(12):1911-8.

Ruiz V, Garrote H, Díaz CA, Fernández L, Amor AM. Electroforesis capilar: nueva técnica en el Instituto de Hematología e Inmunología para el análisis de marcadores oncohematológicos. Rev Cub Hematol Inmunol Hemoter. 2017 [acceso 20/02/2020];33(3). Disponible en: http://www.revhematologia.sld.cu/index.php/hih/article/view/538



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